ATIVIDADE 1 – BIOLOGIA MOLECULAR E FORENSE – 52_2025

Descrição

ATIVIDADE 1 – BIOLOGIA MOLECULAR E FORENSE – 52_2025

A eletroforese em gel de agarose é a maneira mais eficaz de separar fragmentos de DNA de tamanhos variados, de 100 pb a 25 kb. A agarose é isolada dos gêneros de algas marinhas Gelidium e Gracilaria e consiste em subunidades repetidas de agarobiose (L- e D-galactose). Durante a gelificação, os polímeros de agarose se associam de forma não covalente e formam uma rede de feixes cujos tamanhos de poros determinam as propriedades de peneiramento molecular de um gel. O uso da eletroforese em gel de agarose revolucionou a separação de DNA. Antes da adoção dos géis de agarose, o DNA era separado principalmente usando centrifugação em gradiente de densidade de sacarose, que fornecia apenas uma aproximação do tamanho. Para separar o DNA usando eletroforese em gel de agarose, o DNA é carregado em poços pré-moldados no gel e uma corrente é aplicada. A estrutura de fosfato da molécula de DNA (e RNA) é carregada negativamente; portanto, quando expostos a um campo elétrico, os fragmentos de DNA migrarão para o ânodo carregado positivamente. Como o DNA possui uma relação massa/carga uniforme, as moléculas de DNA são separadas por tamanho dentro de um gel de agarose em um padrão tal que a distância percorrida é inversamente proporcional ao logaritmo de seu peso molecular.

Fonte: Disponível em: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC4846332/. Acesso em: 09 abr. 2024.

Figura 1: Eletroforese em gel de agarose. 1 a 16 (amostras), CN (controle negativo), CP (controle positivo), PPM (padrão de peso molecular 100pb)

Fonte: a autora.

A Figura 1 apresenta o resultado da eletroforese em gel de agarose 0,5-3% com brometo de etídio (10 µg/ml) sob luz ultra-violeta, realizada para investigação de bactérias contendo o gene de resistência a antibióticos carbapenêmicos, identificado por um fragmento de 300 pb (pares de base). Com base na figura 1, no conteúdo da disciplina e nos materiais complementares, responda:

1) EXPLIQUE qual a função do CN (controle negativo), CP (controle positivo) e PPM (padrão de peso molecular 100pb).

2) IDENTIFIQUE em quais amostras o gene de resistência a antibióticos carbapenêmicos está presente. JUSTIFIQUE sua resposta.

Materiais complementares:

Disponível em: https://www.ufrgs.br/educiencia/repositorio/proedu/eletroforese%20-%20cartilha%20do%20estudante%20-%20educiencia.pdf. Acesso em: 09 abr. 2025.